By Guido Hermey, Claudia Mahlke, Michael Schwake, Tobias Sommer

Lieber EXPERIMENTATOR,

dieser neue Band soll dem angehenden Neurowissenschaftler einen Überblick über Fragestellungen und Methoden der neurowissenschaftlichen Forschung geben. Deshalb beschreiben wir intestine etablierte Standardmethoden und geben Einblicke in die aktuellen traits und Entwicklungen, die die moderne neurowissenschaftliche Forschung vorantreiben. Der Fokus des Buches liegt auf der Erklärung von grundsätzlichen Mechanismen und Versuchsprinzipien. Zudem weist es auf viele „kleine“ methods des Laboralltags hin, die dem EXPERIMENTATOR das Leben erheblich erleichtern können.

Inhaltlich haben wir uns auf die examine des Vertebratengehirns fokussiert, da es die Möglichkeit bietet, komplexe neuronale Vorgänge zu untersuchen, die z.B. für das Lernen, aber auch für die examine neuronaler Erkrankungen von Bedeutung sind. Methodisch spannen wir dabei den Bogen von molekularen, proteinbiochemischen, zellbiologischen und elektrophysiologischen Ansätzen, über die Etablierung transgener Mausmodelle und deren examine (z.B. in verhaltensbiologischen Studien) bis hin zu nicht-invasiven Imaging-Methoden, die zur Untersuchung des menschlichen Gehirns einsetzbar sind.

Trotz der Komplexität des Inhalts ist das Buch in einem leicht verständlichen Ton geschrieben und richtet sich sowohl an Studenten und Doktoranden, als auch an technische Mitarbeiter und fachfremde Forscher.

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2009). 27 2 Isolierung von RNA aus Gewebe oder Zellen Synthese von markierter cDNA oder cRNA Hybridisierung des Microarrays mit der markierten cDNA oder cRNA Auslesen des Arrays Analyse der Daten Darstellung der Daten z. B. als Cluster Analyse kEinzelzell-PCR Es gibt die Möglichkeit, Elektrophysiologie und Expressionsanalysen zu kombinieren. Wird eine Einzelzelle gepatched und elektrophysiologisch charakterisiert, so besteht die Möglichkeit, anschließend die Zelle in die Patch-Kapillare einzusaugen, die mRNA zu isolieren und in cDNA zu überschreiben.

11 RNA-Interferenz (RNAi) Es wurden in der Vergangenheit drei Nucleinsäurebasierte Verfahren entwickelt, um posttranskriptionell die Genexpression zu unterdrücken. Diese basieren entweder auf antisense-Oligonucleotiden, Ribozymen oder RNA-Interferenz (RNAi). Antisense-Oligonucleotide sind in der Regel ca. 20 Nucleotide lange DNA-Einzelstränge. Diese führen in Zellen durch die Hybridisierung an mRNA zum Abbau durch Ribonuclease H, einem Enzym, das spezifisch RNA-DNA-Duplexe abbaut. 29 2 Ribozyme sind katalytisch aktive RNA-Moleküle, die Ziel-RNA durch die Ausbildung von Wasserstoffbrückenbindungen binden und die Hydrolyse des Phosphodiester-Rückgrats der RNA katalysieren.

Die Applikation von siRNA, also kurzen doppelsträn- 2 linearer RNA-Strang 5‘ 3‘ 5‘ 3‘ shRNA . 12 Short hairpin RNA (shRNA). Ein shRNA-Molekül besteht aus zwei komplementären Sequenzen, die durch einen kurzen Spacer getrennt sind. Das Molekül faltet sich selbst und besitzt eine Haarnadelstruktur gigen RNA Molekülen, oder das Einbringen eines Vektors, der die entsprechenden RNA-Sequenzen auf einem Transkript vereinigt (. Abb. 12). 12). Zellen können sowohl mit siRNA als auch einem shRNA-Vektor transfiziert werden.

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